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环介导等温扩增技术可视化快速检测表皮葡萄球菌方法的建立
李冉, 薛晶, 郭文平, 康精萌, 刘金霞
目的 建立可视化环介导等温扩增(LAMP)检测方法,应用于表皮葡萄球菌的快速检测。
方法 针对表皮葡萄球菌的SesB基因,选择特异性引物,建立环介导等温扩增体系。对反应的可视化方法、体系中的MgSO
4浓度、甜菜碱浓度、反应温度、反应时间进行优化。将优化好的LAMP反应和PCR反应的灵敏度和特异性进行比较。
结果 环介导等温扩增反应体系中最适MgSO
4终浓度为4mM;最适甜菜碱浓度为0.4M;最适反应温度和时间为63 ℃,反应60 min;最适宜的可视化方法为钙黄绿素显色法且可视化结果与琼脂糖凝胶电泳结果基本一致;LAMP和PCR反应均具有较好的特异性,LAMP反应的灵敏度为10 copies/μL,PCR反应的灵敏度为100 copies/μL。
结论 LAMP钙黄绿素可视化检测表皮葡萄球菌感染优于普通PCR,操作简便且不需要昂贵检测设备,有望应用于基层和偏远贫困地区早期诊断。
2023, 40 (6):
456-460.
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