目的 探讨丝胶对PI3K/Akt/mTOR信号通路的调控及其对三阴性乳腺癌（TNBC) MDA-MB-468细胞自噬的诱导作用,并阐明作用靶点。方法 将MDA-MB-468细胞随机分为对照组（不含药物）、实验组（8 mg·mL^-1丝胶）、Akt激活剂组（8 mg·mL^-1丝胶+10 μmol·L^-1 SC79）,分别给予相应药物作用24 h后,采用RT-qPCR法检测各组细胞PI3K、Akt、mTOR、自噬效应蛋白（Beclin1）、自噬相关蛋白5（ATG5）、微管相关轻链蛋白3（LC3）、螯合体1（P62）mRNA表达水平;Western blotting法检测各组细胞PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR、Beclin1、ATG5、LC3、P62蛋白表达水平;免疫荧光染色法检测各组细胞LC3、P62蛋白的定位及荧光强度。结果 与对照组相比,实验组MDA-MB-468细胞PI3K、Akt、mTOR、P62 mRNA及PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR、P62蛋白水平均显著降低（P<0.05）,Beclin1、ATG5、LC3 mRNA水平及Beclin1、ATG5、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白水平均显著升高（P<0.05）;与实验组相比,Akt激活剂组MDA-MB-468细胞PI3K、Akt、mTOR、P62 mRNA及PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR、P62蛋白水平均显著升高（P<0.05）,Beclin1、ATG5、LC3 mRNA水平及Beclin1、ATG5、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白水平均显著降低（P<0.05）。结论 丝胶对MDA-MB-468细胞自噬的诱导作用可通过以Akt为靶点调控PI3K/Akt/mTOR信号通路的转导来实现。

目的 观察丝胶对链脲佐菌素（STZ）致损伤大鼠胰岛素瘤细胞（INS-1细胞）PI3K/Akt信号通路和糖酵解的调控作用。方法 实验以体外培养的INS-1细胞为研究对象随机分为五组,正常对照组、模型组、丝胶组、Akt1抑制剂组、Akt1激动剂组。运用蛋白印迹和实时荧光定量PCR法检测各分组细胞的磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）,蛋白激酶B（Akt）,磷酸果糖激酶-1（PFK1）,6-磷酸果糖-2,6-二磷酸酶（PFKFB2）的蛋白及mRNA的表达情况。结果 与正常对照组相比,模型组PI3K,p-Akt,PFK1,PFKFB2的蛋白表达显著下降（P<0.05）;丝胶组与模型组相比PI3K,p-Akt,PFK1,PFKFB2的蛋白表达显著增高（P<0.05）;Akt1抑制剂组与丝胶组相比,p-Akt,PFK1,PFKFB2的蛋白表达显著降低（P<0.05）;Akt1激动剂组与丝胶组相比,p-Akt,PFK1,PFKFB2的蛋白呈现上升的趋势。各组INS-1细胞中PI3K,Akt,PFK1,PFKFB2 mRNA的变化趋势与蛋白一致。结论 丝胶对STZ致损伤INS-1细胞发挥保护作用的机制可能是,靶向Akt1影响PI3K/Akt信号通路增强糖酵解。

目的 探讨丝胶是否通过靶向Akt1调控磷酸肌醇-3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（protein kinase B,Akt）信号通路促进链脲佐菌素（STZ）致损伤大鼠胰岛素瘤细胞（INS-1细胞）增殖。方法 INS-1细胞随机分为4组：对照组（不予任何处理）、模型组（给予10 mmol/L STZ处理细胞）、丝胶组（给予10 mmol/L STZ+600 μg/mL丝胶处理细胞）、抑制剂组（给予10 mmol/L STZ+600 μg/mL丝胶+0.3 mmol/L的Akt1抑制剂A-674563处理细胞）。药物作用时间均为24 h。CCK-8法检测各组INS-1细胞存活率。免疫蛋白印迹法（western blot）检测PI3K/Akt信号通路相关蛋白PI3K、p-Akt和增殖相关蛋白增殖细胞核抗原（PCNA）、细胞核增殖相关抗原Ki67（Ki67）的表达情况。结果 与对照组相比,模型组INS-1细胞存活率下降（P<0.05）,PI3K、p-Akt1、PCNA和Ki67的蛋白表达显著下降（P<0.05);与模型组相比,丝胶组INS-1细胞存活率上升（P<0.05）,PI3K、p-Akt1、PCNA和Ki67的蛋白表达显著增多（P<0.05）;与丝胶组相比,抑制剂组INS-1细胞存活率下降（P<0.05）,p-Akt1、PCNA和Ki67的蛋白表达显著下降（P<0.05）。结论 丝胶具有促进STZ致损伤INS-1细胞增殖的作用,其作用机制与丝胶通过靶向Akt1调控PI3K/Akt信号通路有关。

目的 探讨丝胶对链脲佐菌素（STZ）致损伤大鼠胰岛素瘤细胞（INS-1细胞）的保护作用。方法 实验以体外培养的INS-1细胞为研究对象,随机分为5组：正常对照组（常规条件培养细胞）、模型组（培养基中含10mmol/L的STZ）、丝胶低、中、高浓度组（培养基中分别含10mmol/L的STZ,及150μg/mL、300μg/mL、600μg/mL的丝胶）,每组细胞药物作用时间均为24h。蛋白印迹和实时荧光定量PCR法检测各组细胞BCL-2与P53蛋白及mRNA的表达情况。流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况。结果 与正常对照组相比,在模型组中,INS-1细胞中BCL-2蛋白和mRNA的表达显著减少,P53蛋白和mRNA的表达显著增加,早期凋亡率显著升高（P<0.05）。与模型组相比,丝胶各组INS-1细胞BCL-2蛋白与mRNA的表达均显著增多,P53的蛋白与mRNA的表达均显著下降,早期凋亡率显著下降（P<0.05）;3个丝胶组两两比较差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 丝胶对STZ致损伤INS-1细胞发挥保护作用的机制与调控凋亡蛋白,抑制INS-1细胞凋亡有关。

目的 探讨丝胶是否通过影响自噬和氧化应激发挥保护链脲佐菌素（STZ）致胰岛素瘤细胞（INS-1细胞）损伤的作用。方法 INS-1细胞随机分为A、B、C、D、E五组。A组（正常组）细胞常规条件培养24h,不做其他处置;B组（STZ致损伤组）细胞中加入10mmol/L的STZ培养24h;C组、D组、E组细胞中分别加入10mmol/L的STZ和不同剂量的丝胶（150μg/mL、300μg/mL、600μg/mL）培养24h。分别采用免疫蛋白印迹法和实时荧光定量PCR法检测细胞自噬相关基因蛋白和mRNA表达,DCFH-DA活性氧（ROS）荧光探针检测细胞ROS的含量。结果 C组、D组、E组LC3B-II/LC3B-I、SIRT1、ATG5、BECLIN1、PINK1蛋白和mRNA的表达均明显高于B组（P<0.05）;3组细胞各指标蛋白和mRNA的表达水平依次为E组>D组>C组,差异有统计学意义（P<0.05）。C组、D组、E组INS-1细胞ROS含量明显低于B组（P<0.05）;3组细胞ROS含量依次为E组<D组<C组,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 丝胶具有保护STZ致INS-1细胞损伤的作用,其保护机制与丝胶能减轻氧化应激和增强自噬作用有关。

目的 采用生物信息学分析,筛选与三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer, TNBC)发生发展相关的关键基因和通路。方法 选取GEO (Gene Expression Omnibus)数据库中TNBC基因芯片数据集GSE76124及正常乳腺组织数据集GSE112825,应用R软件筛选差异表达基因。使用DAVID数据库对上述差异表达基因进行GO (Gene Ontology)功能分析及KEGG (Kyoto Encyclopedia of Genes and Genome)通路分析。应用STRING在线数据库和Cytoscape软件构建蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络,并筛选TNBC的hub genes、枢纽模块和seed genes。结果 分析芯片数据,筛选得到1091个差异表达基因,GO和KEGG分析结果显示,差异表达基因与芳香类物质生物合成、杂环生物合成等过程有关,并富集在cancer通路、PI3K/AKT通路上。通过构建PPI网络筛选得到了10个hub genes、2个枢纽模块和19个seed genes。结论 本研究筛选得到10个hub genes和19个seed genes,这些基因在TNBC的发生发展中可能存在潜在的作用,为下一步研究提供生物信息学分析参考。

目的:观察丝胶对链脲佐菌素（STZ）致损伤大鼠胰岛素瘤细胞（INS-1细胞）Bax表达的影响。方法:INS-1细胞分为三组,正常对照组（不予任何药物处理）、STZ处理组（10mmol/L的STZ处理细胞24h）、丝胶保护组（10mmol/L的STZ、300μg/ml的丝胶共同处理细胞24h）。采用CCK-8法观察各组细胞的活力,蛋白印迹和实时荧光定量PCR法检测各组细胞Bax蛋白和mRNA的表达情况。结果:STZ处理组INS-1细胞的活力明显低于正常对照组、Bax蛋白和mRNA表达明显高于正常对照组（P<0.05）;丝胶保护组INS-1细胞的活力明显高于STZ处理组、Bax蛋白和mRNA表达明显低于STZ处理组（P<0.05）。结论:丝胶对STZ致损伤大鼠INS-1细胞具有保护作用,其机制可能与下调Bax的表达有关。

目的:观察远志对糖尿病周围神经病变（DPN）大鼠坐骨神经相关神经元胞体损伤的预防保护作用。方法:Wistar大鼠随机分为3组(n=12)：空白对照组,DPN模型组及远志预防组。DPN模型组和远志预防组大鼠建立链脲佐菌素致糖尿病模型后,远志预防组大鼠给予远志（2.7g/kg/d）灌胃6周。以大鼠尾部感觉神经传导速度（SNCV）<30m/s为标准建立DPN大鼠模型。采用免疫组织化学染色法检测坐骨神经对应背根节神经元Bcl-2、Bax阳性细胞数,免疫印迹法检测背根节Bcl-2、Bax蛋白的表达,TUNEL法检测背根节神经元的凋亡指数。结果:与空白对照组比较,DPN模型组大鼠背根节Bcl-2阳性细胞数明显减少、Bcl-2的表达明显降低,Bax阳性细胞数明显增多、Bax的表达和凋亡指数明显升高（P<0.01）。与DPN模型组比较,远志预防组大鼠背根节Bcl-2阳性细胞数明显增多、Bcl-2的表达明显升高,Bax阳性细胞数明显减少、Bax的表达和凋亡指数明显降低（P<0.01）。结论:远志可通过上调DPN大鼠背根节神经元胞体Bcl-2的表达,减少Bax的表达,抑制背根节神经元凋亡,预防DPN大鼠背根节神经元胞体损伤。

目的:探讨丝胶对2型糖尿病大鼠胰腺磷脂酰肌醇-3-激酶（phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K）mRNA表达的影响。方法:雄性SD大鼠随机分为3组,正常对照组、糖尿病模型组、丝胶治疗组。以高脂高糖饲料喂养联合链脲佐菌素（35mg/kg,2次）注射的方法建立2型糖尿病大鼠模型,丝胶治疗组大鼠给予丝胶（2.4g/kg/d）灌胃。采用葡萄糖氧化酶法检测每组大鼠的血糖,Real Time Q-PCR法检测每组大鼠胰腺PI3K mRNA的表达。结果:与正常对照组比较,糖尿病模型组大鼠的血糖明显升高,胰腺PI3K mRNA的表达明显降低（P<0.05）;与糖尿病模型组比较,丝胶治疗组大鼠的血糖明显降低,胰腺PI3K mRNA的表达明显升高（P<0.05）。结论:丝胶可能通过提高胰腺PI3K的表达调节胰岛素PI3K-Akt信号通路,从而起到降低血糖的作用。

目的:观察海扇壳源性碳酸钙纳米微粒（CCNPs）对雌性SD大鼠的急性毒性作用,初步探讨CCNPs的安全剂量。方法:健康雌性SD大鼠随机分为四组,对照组,CCNPs低、中、高剂量组,CCNPs各剂量组大鼠分别给予不同剂量（30、60、120mg/kg/d）CCNPs尾静脉注射,连续14d;对照组大鼠给予生理盐水尾静脉注射,连续14d。记录各组大鼠的生存率、毒性反应和体重的变化,HE染色观察大鼠主要脏器的病理变化。结果:实验结束时,低剂量组大鼠生存率为100.00%,中、高剂量组大鼠生存率分别为66.67%（4/6）和50.00%（3/6）;CCNPs低、中剂量组大鼠体重与对照组比较差异无统计学意义（P>0.05）,CCNPs高剂量组大鼠的体重明显低于对照组（P<0.05）。组织病理学观察显示,低剂量组大鼠肝脏、脾、肺、心脏和肾脏的病理变化较轻或未观察到明显病理变化,而中、高剂量组大鼠各脏器的病理变化明显较重。结论:低剂量CCNPs连续14天静脉给药不会引起雌性SD大鼠严重的急性毒性反应,CCNPs的安全剂量为≤30mg/kg。

目的: 研究大豆异黄酮对慢性脑缺血大鼠海马胆碱能神经元的保护作用。方法: 健康成年雌性SD大鼠30只,随机分为假手术组、模型组、治疗组（n=10）,模型组、治疗组采用永久结扎去势大鼠双侧颈总动脉的方法建立慢性脑缺血大鼠模型,假手术组分离双侧卵巢和颈总动脉,不结扎。建立模型后,治疗组术大鼠给予大豆异黄酮（9mg/kg/d）灌胃21d。采用SP免疫组织化学染色法观察各组大鼠海马CA1区神经元胆碱乙酰基转移酶（choline acetyltransferase,ChAT）蛋白表达的变化。采用MiVnt图像分析系统对免疫组织化学染色阳性结果进行定量分析。结果: 假手术组大鼠海马CA1区ChAT蛋白的表达显著多于模型组和治疗组（P<0.05）;治疗组大鼠海马CA1区ChAT蛋白的表达较模型组明显增多（P<0.05）。结论: 大豆异黄酮对慢性脑缺血大鼠海马胆碱能神经元具有保护作用,其机制可能与上调海马神经元ChAT蛋白的表达有关。

目的: 研究丝胶对2型糖尿病大鼠肝脏IR的调节作用。方法: 36只SPF级雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组和实验组,每组12只。采用高脂高糖饲料喂养+腹腔注射STZ的方法建立2型糖尿病大鼠模型。成模后,给予实验组大鼠丝胶灌胃35d。采用葡萄糖氧化酶法检测各组大鼠空腹血糖;Real Time Q-PCR法检测各组大鼠肝脏IR mRNA的表达。结果: 与模型组大鼠相比,实验组大鼠血糖明显降低,IR mRNA的表达明显升高(P<0.05)。结论: 丝胶可能通过上调肝脏IR的表达来增强胰岛素信号的转导效应,进而起到降低血糖的作用。

目的: 分析2型糖尿病大鼠胰腺胰岛素受体底物-1（insulin receptor substrate-1,IRS-1）mRNA表达的变化及丝胶的调控作用。方法: 雄性SD大鼠随机分组,正常对照组、糖尿病模型组、丝胶用药组。高脂饲料+高糖饲料喂养联合链脲佐菌素注射建立2型糖尿病大鼠模型,成功建模后,丝胶用药组大鼠给予丝胶（2.4g/kg）灌胃。采用葡萄糖氧化酶法检测各组大鼠的血糖,Real Time Q-PCR法检测各组大鼠胰腺IRS-1 mRNA的表达。结果: 与正常对照组大鼠比较,模型组大鼠的血糖明显升高,胰腺IRS-1 mRNA的表达明显降低（P<0.05）;与模型组大鼠比较,丝胶用药组大鼠的血糖明显降低,胰腺IRS-1 mRNA的表达明显升高（P<0.05）。结论: 丝胶可能通过上调胰腺IRS-1的表达起到降低血糖的作用。

目的: 探讨蚕茧提取物—丝胶对大鼠INS-1细胞Bcl-2蛋白表达的影响。方法: INS-1细胞分为三组,正常对照组、链脲佐菌素（STZ）损伤组和丝胶处理组。正常对照组细胞用不含药物的完全培养基培养;STZ损伤组细胞用完全培养基配制的STZ溶液（10mmol/L）培养24h;丝胶处理组细胞用完全培养基配制的同时含STZ（10mmol/L）和丝胶（300μg/ml）的溶液培养24h。采用Western Blotting法检测各组INS-1细胞Bcl-2蛋白的表达情况。结果: 与正常对照组相比,STZ损伤组INS-1细胞Bcl-2蛋白的表达明显降低(P<0.05);与STZ损伤组比较,丝胶处理组细胞Bcl-2蛋白的表达明显升高(P<0.05)。结论: 丝胶可能通过上调Bcl-2蛋白的表达抑制β细胞凋亡。

目的: 探讨丝胶对STZ致损伤的大鼠胰岛素瘤INS-1细胞活性和胰岛素分泌的影响。方法: 以链脲佐菌素（STZ）诱导INS-1细胞损伤,细胞分为正常组、STZ组和丝胶组(300μg/L)。普通光学倒置显微镜观察各组细胞的一般状态;MTT法测定细胞活性;ELISA法检测培养上清中胰岛素的含量。结果: 与正常组相比,STZ组细胞活性明显下降,培养上清中胰岛素的含量明显降低（P<0.05）。经300μg/L丝胶处理后,INS-1细胞活性、培养上清中胰岛素的含量均明显升高（P<0.05）。结论: 丝胶蛋白可提高STZ致损伤大鼠胰岛素瘤INS-1细胞的活性,以及促进胰岛素的分泌。